مقاله تولید و کنترل کیفی رادیوداروی AntiدرCD20 نشاندار شده با رادیوایزوتوپIدر131به دو روش کلرآمیندرT و یدوژن جهت کاربرد در سرطان سیستم لنفاوی دارای 6 صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد مقاله تولید و کنترل کیفی رادیوداروی AntiدرCD20 نشاندار شده با رادیوایزوتوپIدر131به دو روش کلرآمیندرT و یدوژن جهت کاربرد در سرطان سیستم لنفاوی کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
این پروژه توسط مرکز مرکز پروژه های دانشجویی آماده و تنظیم شده است
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی مقاله تولید و کنترل کیفی رادیوداروی AntiدرCD20 نشاندار شده با رادیوایزوتوپIدر131به دو روش کلرآمیندرT و یدوژن جهت کاربرد در سرطان سیستم لنفاوی،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن مقاله تولید و کنترل کیفی رادیوداروی AntiدرCD20 نشاندار شده با رادیوایزوتوپIدر131به دو روش کلرآمیندرT و یدوژن جهت کاربرد در سرطان سیستم لنفاوی :
مقدمه:
Rituximab با نام های تجاری Riyuxan و MabThera یک آنتی بادی مونوکلونال کایمریک بر علیه پروتئین CD20 است که در ابتدا بر روی سطح سلولهای B سیستم ایمنی بدن یافت شد وبرای درمان بیماریهایی که با تعداد زیاد سلولهای B، سلولهای B با فعالیت بیش از حد یا سلولهای Bنا کار آمد مشخص شده اند، شامل بسیاری از لنفوماها “لوسمی “رد پیوند بافتی و اختلالات اتوایمیون می شود1] و.[2 لنفومای غیر هوچکین (NHL)یک بدخیمی لنفوسیتها است که در %80 موارد منشاء آن از سلولهای B می باشد. با گسترش آنتی بادیهای منوکلونال (mAbs) ایمیونوتراپی با آنها و نشاندار کردن آنها با مواد رادیواکتیو جهت سلولهای لنفوما به عنوان هدف آغاز شد. در بیماران مبتلا به لنفوم فولیکولار مقاوم یا عود کننده، آنتی بادیهای مونوکلونال نظیر Rituximab بطور موفقیت آمیزی مورد استفاده قرار گرفته اند.[3]کلرآمینT یا نمک سدیم n کلرو-4 متیل- بنزن سولفون آمید، عامل اکسید کننده بوده که I کاتیونیک را از I(Iodide)ایجاد می کند تا بر روی ریشه تیروزین آنتی بادی ها قرار گیرد و اولین بار توسط Hunter و Greenwood برای یدیناسیون پروتئینها به کار رفته است .[4] کلرآمینT در محلولهای مایی، هیپوکلرو اسید تشکیل داده که اسید حاصل اکسیداسیون ملایم مورد نیاز را فراهم می کند. شرایط واکنش یدیناسیون به راحتی با تغییر غلظت مواد واکنش دهنده، درجه حرارت و زمان قابل کنترل می باشد. واکنش یدیناسیون به روش کلرآمینT ، با اضافه کردن عامل احیاء کننده (معمولا” سدیم متا بی سولفیت) به مقدار اضافی خاتمه می یابد.[5]
Franker و Speck اولین بار یدوژن را به عنوان معرف یدیناسیون پروتئین ها به کار بردند .[6] یدوژن یا 1,3,4,6-tetrachloro-3,6- Diphenylglycourilبینهایت پایدار بوده و در آب تقریبا” نا محلول است و باعث یدیناسیون سریع در فاز جامد در محلول های مایی ید و پروتئین ها می شود. یدوژن در کلروفرم یا متیلن کلراید حل می شود و سپس از دیواره های داخلی ظرف تبخیر شده و در دسیکاتور نگهداری می شود. مخلوط یدیناسیون حاوی آنتی بادی و Na131I در بافر مناسب به ظرف پوشش داده شده با یدوژن اضافه می شوند. واکنش به صورت Interfaceبه مدت 5 تا 15 دقیقه ادامه یافته و سپس با انتقال مخلوط واکنش به ظرف دیگری خاتمه می یابد. بنابراین نیازی به اضافه نمودن معرف احیاء کننده یا سانتریفیوژ مخلوط واکنش نمی باشد.[7]
روش کار:
آنتی بادی آنتی CD20 از شرکت اف هافمن- لارویش بازل سوئیس که توسط شرکت شیمی درمانی سبحان رشت بسته بندی و توزیع می شود بصورت ویال حاوی 100 میلی گرم آنتی بادی در 10 میلی لیتر تهیه شد.در آیودیناسیون به روش کلرآمین-T، به تیوب حاوی 1 میلی گرم آنتی بادی بافر فسفات 0/5 مولار با pH=7، 5 میلی کوری سدیم ایوداید-131 ، محلول 2 میلی گرم در میلی لیتر بافر فسفات 0/05 مولار اضافه و به مدت 45 ثانیه بهم زده شد، به منظور متوقف کردن واکنش محلول 2 میلی گرم سدیم متا بی سولفیت در یک میلی لیتر از بافر فسفات 0/05 مولار و محلول 10 میلی گرم در پتاسیم ایوداید در یک میلی لیتر بافر فسفات 0/05 مولار به ظرف واکنش افزوده شد. این مخلوط بلافاصله به منظور جداسازی به ستون سفادکس G-25 منتقل شد و با فاز متحرک فسفات بافر سالین با pH=7شستشو داده شد.پایداری آن در فواصل زمانی 1و3 و 24 ساعت با استفاده از روش کروماتوگرافی کاغذی و فاز متحرک فسفات بافر سالین بررسی شد. به منظور بررسی توزیع بیولوژیکی آنتی بادی نشاندار شده با ید-131 از موش سوری استفاده شد. آزمایش در سری های 3 تایی موش سوری انجام گردید به این منظور به هر موش 100 میکرولیتر آنتی بادی نشاندار شده با اکتیویته 100 میکرو کوری تزریق شد و در زمانهای 4 ، 24 و 48 ساعت بعد از تزریق موشها با استفاده از گاز دی اکسید کربن کشته شدند و خون، قلب، کبد، کلیه ها، طحال، معده، روده، تیرویید، ریه ها، دم و بقیه بدن جدا و در دستگاه شمارنده گاما شمارش شدند، سپس درصد دوز تزریق شده در گرم بافت محاسبه گردید. ایمونوراکتیویته از روش Lindmoمحاسبه شد. تعداد 6× 107 از سلولهای RAJI (آنتی ژن CD20در سطح این سلولها به مقدار زیاد یافت میشود) شمرده و داخل 1 سی سی محیط کشت شناور شد. در 5 ظرف دیگر تعداد سلولها را به ترتیب نصف تعداد سلولها در ظرف قبل ریخته، ترکیب -Ritoximab131Iبر روی سلولها اثر داده شد. بعد از گذشت 2 ساعت سلولها سانتریفیوژ و چند بار شسته شدند تا فقط اکتیویته متصل به سلولها باقی بماند. منحنی اکتیویته متصل به سلولها بر علیه عکس تعداد سلولها رسم می شود که شیب این منحنی درصد آنتی بادی های نشاندار فعال پس از نشاندارسازی را نشان می دهد.در روش یدوژن ، به لوله پوشش داده شده، 1 میلی گرمآنتی بادی و 30 میلی کوری سدیم ایوداید( ید-(131و بافر سدیم
فسفات 0/5 مولار pH=7.4اضافه شد. پس از 10 دقیقه بافر سدیم فسفات 0/05 مولار حاوی 1 مولار سدیم کلراید pH= 7.4 اضافه و مخلوط به منظور خاتمه واکنش به ویال دیگری منتقل و به مدت 10 دقیقه در دمای محیط انکوبه شد، سپس بافر سدیم فسفات 0/05 مولار حاوی %0/5 سرم آلبومین گاوی pH= 7.4به مخلوط اضافه و بر روی ستون سفادکس G-25با استفاده از همین بافر جداسازی گردید (راندمان نشاندار سازی .(%94 پایداری و بررسی ایمینوری اکتیویتی مطابق روش کلرآمین-T انجام شد. توزیع بیولوژیکی مشابه روش کلرآمین-T در فواصل زمانی 3 و 23 ساعت انجام گردید.
نتایج:
راندمان نشاندار سازی یک میلی گرم آنتی بادی با 5 میلی کوری ید- 131 به روش کلر آمین-T ، %86 و در روش یدوژن با 30 میلی کوری ید-%94 131 بود و آزمایش پایداری نشان داد که آنتی بادی نشاندار شده با روش کلرآمین-T در فسفات بافر سالین در دمای 4 درجه سانتیگراد تا 24 ساعت بعد از نشاندارسازی تا %70 (نمودار (1 و در روش یدوژن تا %82 (نمودار (2 پایداری خود را حفظ کرده است.
نمودار -1پایداری آنتی بادی نشاندار شده با ید-131 به روش کلرامین-T در زمانهای 1و3و24 ساعت در 4 درجه سانتیگراد
نمودار -2 پایداری آنتی بادی نشاندار شده با ید-131 به روش یدوژن در زمانهای 1و3و24 ساعت در 4 درجه سانتیگراد
درصد بالای آنتی بادی در خون نسبت به سایر اندامها در هر دو روش نشانگر نسبت بالای Target/Nontargetمی باشد(نمودار 3 و .(4
اشتراک‌گذاری:
دانلود این فایل
